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人類免疫缺陷病毒1型p24抗原檢測(cè)ELISA試劑盒

產(chǎn)品型號(hào)：
產(chǎn)品時(shí)間：2024-08-10
簡(jiǎn)要描述：人類免疫缺陷病毒1型p24抗原檢測(cè)ELISA試劑盒，2-8度保存！只可用于科研實(shí)驗(yàn)，不得用于其他??！

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

人類免疫缺陷病毒1型p24抗原ELISA試劑盒

【產(chǎn)品名稱】

通用名：人類免疫缺陷病毒1型p24抗原酶聯(lián)免疫試劑盒

英文名：ENZYME IMMUNOASSAY FOR DETECTION OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS TYPE I P24 ANTIGEN IN HUMAN SERUM, PLASMA AND CELL CULTURE SUPERNATANT

【包裝規(guī)格】

96人份/盒。

【預(yù)期用途】

本試劑盒用于人類免疫缺陷病毒1型p24抗原（Human Immunodeficiency Virus Type 1 p24 Antigen）的定量檢測(cè)，適用于人血清（或血漿）及細(xì)胞培養(yǎng)上清液等標(biāo)本，僅供研究使用。

人類免疫缺陷病毒1型p24抗原ELISA試劑盒

【檢驗(yàn)原理】

本產(chǎn)品采用固相酶聯(lián)免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）檢測(cè)人血清（或血漿）中的游離HIV-1 p24抗原和細(xì)胞培養(yǎng)上清液等標(biāo)本中的HIV-1 p24抗原。本分析方法是基于雙抗體夾心的非競(jìng)爭(zhēng)性免疫分析。校準(zhǔn)品和樣品中HIV-1 p24抗原與固相抗- p24單克隆抗體和生物素標(biāo)記的抗-p24多克隆抗體通過(guò)免疫反應(yīng)，形成固相抗-p24單克隆抗體—p24抗原—抗-p24多克隆抗體-生物素復(fù)合物；溫育后洗滌，洗去非特異或多余的抗原和多余的生物素標(biāo)記的抗- p24多克隆抗體；然后加入HRP（Horseradish Peroxidase，辣根過(guò)氧化物酶）標(biāo)記的鏈親和素，形成固相抗- p24單克隆抗體—p24抗原—抗-p24多克隆抗體-生物素—鏈親和素-HRP復(fù)合物；溫育后洗滌，洗去多余的HRP標(biāo)記的鏈親和素。加入TMB-H₂O₂底物溶液，HRP催化H₂O₂氧化TMB生成藍(lán)色的產(chǎn)物（zui大吸收峰655nm），加入終止液終止酶催化反應(yīng)，生成黃色產(chǎn)物（zui大吸收峰450nm）。其吸光度與校準(zhǔn)品和樣品中的HIV-1 p24抗原濃度成正相關(guān)。通過(guò)劑量－反應(yīng)曲線可得出樣品中HIV-1 p24抗原濃度。

試驗(yàn)類型	溫育時(shí)間	試驗(yàn)所需時(shí)間	試驗(yàn)溫度	試驗(yàn)所需樣本體積
免疫度量分析	120 分鐘	大約150分鐘	37°C 和室溫（18~30℃）	75μL

人類免疫缺陷病毒1型p24抗原ELISA試劑盒

【主要組成成份】

抗體包被板

（Antibody Coated Microplate）

1塊

包被有鼠抗-HIV-1 p24單克隆抗體的聚苯乙烯微孔板，約200ng/孔。8孔×12條。

鋁箔袋密封包裝，含干燥劑。標(biāo)簽編號(hào)為R1。

HIV-1 p24抗原校準(zhǔn)品

（HIV-1 p24 Antigen Calibrator）

1mL×1支

重組HIV-1 p24抗原溶液，200IU/mL（約相當(dāng)于4,000pg/mL），稀釋液為校準(zhǔn)品稀釋液。用英國(guó)國(guó)家生物標(biāo)準(zhǔn)與檢定所(National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC)提供的WHO標(biāo)準(zhǔn)品（HIV-1 p24 Antigen 90/636）校準(zhǔn)。

綠色PP蓋子和無(wú)色PP塑料管。標(biāo)簽編號(hào)為R2。

校準(zhǔn)品稀釋液

（Calibrator Diluent）

20mL×1瓶

磷酸鹽緩沖液，含動(dòng)物血清和鈣化的正常人血漿（經(jīng)ELISA檢測(cè)，HBsAg、抗-HCV和抗-HIV 1+2均為陰性），pH約7.3。防腐劑為NaN₃（不超過(guò)0.1%）和EDTA。

綠色PP蓋子和無(wú)色HPDE塑料瓶。標(biāo)簽編號(hào)為R3。

生物素標(biāo)記抗體

（Biotinylated Antibody）

5mL×1瓶

生物素標(biāo)記的兔抗-HIV-1 p24多克隆抗體，約4µg/mL。緩沖液為Tris-HCl，含動(dòng)物血清、穩(wěn)定劑、表面活性劑和綠色染料，pH約7.4。防腐劑為NaN₃（不超過(guò)0.1%）。

藍(lán)色PP蓋子和無(wú)色HPDE塑料瓶。標(biāo)簽編號(hào)為R4。

HRP標(biāo)記鏈親和素

（HRP Conjugated Streptavidin）

20mL×1瓶

HRP標(biāo)記鏈親和素，約0.1µg/mL（25mU/mL HRP）。緩沖液為Tris-HCl，含動(dòng)物血清、穩(wěn)定劑、表面活性劑和紅色染料，pH約7.4。防腐劑為ProClin^®300（不超過(guò)1%）。

紅色PP蓋子和棕色HPDE塑料瓶。標(biāo)簽編號(hào)為R5。

濃縮洗滌液

（Concentrated Wash Buffer）

50mL×1瓶

含表面活性劑的磷酸鹽緩沖液，20倍濃縮。防腐劑為ProClin^®300（不超過(guò)1%）。

無(wú)色PP蓋子和無(wú)色HPDE塑料瓶。標(biāo)簽編號(hào)為R6。

底物緩沖液

（Substrate Buffer）

10mL×1瓶

含H₂O₂的乙酸鹽緩沖液，pH約5.0。

無(wú)色PP蓋子和無(wú)色HPDE塑料瓶。標(biāo)簽編號(hào)為R7。

顯色劑

（Chromogen Solution）

10mL×1瓶

含TMB的乙酸溶液，pH約3.0。

白色PP蓋子和棕色HPDE塑料瓶。標(biāo)簽編號(hào)為R8。

終止液

（Stop Solution）

10mL×1瓶

2mol/L H₂SO₄溶液。

黃色PP蓋子和無(wú)色HPDE塑料瓶。標(biāo)簽編號(hào)為R9。

封板膜

（Plate Sealer）

6張

用于溫育時(shí)微孔板的密封。

說(shuō)明書

（Instruction for Use）

1份

本產(chǎn)品使用說(shuō)明。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

試劑盒置2~8℃保存，有效期為12個(gè)月。

【適用儀器】

酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱等。

【樣本要求】

樣本：人血清（或血漿）樣本，和細(xì)胞培養(yǎng)上清液等標(biāo)本。
存放：樣本于2~8℃可儲(chǔ)存2天；樣本長(zhǎng)期儲(chǔ)存應(yīng)放置于-20℃或-20℃以下環(huán)境中，且不宜反復(fù)凍融5次以上。

【檢驗(yàn)方法】

試劑配制方法

HIV-1 p24校準(zhǔn)品系列的配制：

取6支離心管，編號(hào)A、B、C、D、E和F。管F中取900µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入100µL HIV-1 p24校準(zhǔn)品（200IU/mL，4,000pg/mL），混勻，作1:10稀釋，配制成校準(zhǔn)品F（20IU/mL，400pg/mL）；管E中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入500µL校準(zhǔn)品F，混勻，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品E（10IU/mL，200pg/mL）；管D中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入500µL校準(zhǔn)品E，混勻，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品D（5IU/mL，100pg/mL）；管C中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入500µL校準(zhǔn)品D，混勻，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品C（2.5IU/mL，50pg/mL）；管B中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入500µL校準(zhǔn)品C，混勻，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品B（1.25IU/mL，25pg/mL）；以校準(zhǔn)品稀釋液作為校準(zhǔn)品A。共配制成6個(gè)濃度的HIV-1 p24校準(zhǔn)品系列（A-F）：A 0、B 1.25IU/mL（25pg/mL）、C 2.5IU/mL（50pg/mL）、D 5IU/mL（100pg/mL）、E 10IU/mL（200pg/mL）和 F 20IU/mL（400pg/mL）。配制好的HIV-1 p24校準(zhǔn)品系列應(yīng)保存在2~8°C，于一月內(nèi)使用。

校準(zhǔn)品濃度	離心管編號(hào)	校準(zhǔn)品稀釋液	加入
20IU/mL（400pg/mL）	F	900µL	100µL R2
10IU/mL（200pg/mL）	E	500µL	500µL 管 F
5IU/mL（100pg/mL）	D	500µL	500µL 管E
2.5IU/mL（50pg/mL）	C	500µL	500µL 管D
1.25IU/mL（25pg/mL）	B	500µL	500µL 管C

工作濃度洗滌液的配制：

用純水（蒸餾水或去離子水）將濃縮洗滌液稀釋20倍，即為工作濃度洗滌液。工作濃度洗滌液應(yīng)保存在2~8℃，于一月內(nèi)使用。

標(biāo)準(zhǔn)操作方法

從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔板條，裝至微孔板架上。設(shè)空白對(duì)照1孔，HIV-1 p24校準(zhǔn)品A、B、C、D、E和F各2孔，其余各孔為待測(cè)樣品，建議每個(gè)待測(cè)樣品均設(shè)置2孔；編號(hào)標(biāo)記。向各孔內(nèi)分別加入25μL的生物素標(biāo)記抗體（空白對(duì)照孔不加），然后再向各孔內(nèi)分別加入75μL的HIV-1 p24校準(zhǔn)品或待測(cè)樣品，輕輕振蕩微孔板，使內(nèi)容物充分混勻。
用封板膜將微孔板密封，置37℃溫育60分鐘。
棄去微孔板反應(yīng)孔內(nèi)液體，每孔（含空白對(duì)照孔）加入350μL工作濃度洗滌液，然后將洗滌液棄去。重復(fù)洗板共5次，zui后拍干。
每孔加 HRP標(biāo)記鏈親和素100μL（空白對(duì)照孔不加），用封板膜將微孔板密封，置37℃溫育30分鐘。
棄去微孔板反應(yīng)孔內(nèi)液體，每孔（含空白對(duì)照孔）加入350μL工作濃度洗滌液，然后將洗滌液棄去。重復(fù)洗板共5次，zui后拍干。
每孔加底物緩沖液和顯色劑各50μL（含空白對(duì)照孔），用封板膜將微孔板密封，置室溫（18~30℃）避光溫育30分鐘。
每孔加終止液50μL（含空白對(duì)照孔），輕輕振蕩微孔板，使內(nèi)容物充分混勻。
終止反應(yīng)后1小時(shí)內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處，測(cè)定各孔吸光度值，參考波長(zhǎng)選擇620-700nm。

數(shù)據(jù)處理

求出HIV-1 p24抗原校準(zhǔn)品的吸光度平均值。
以HIV-1 p24抗原校準(zhǔn)品的吸光度平均值為縱軸，以HIV-1 p24校準(zhǔn)品的濃度為橫軸，在雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)圖上作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
如果待測(cè)樣品試驗(yàn)了2孔，求出待測(cè)樣品的吸光度平均值。
將測(cè)得的樣品的吸光度值（或吸光度平均值）在上述標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出樣品中的HIV-1 p24抗原的濃度。也可以通過(guò)軟件用zui小二乘法擬合曲線，求出樣品中的HIV-1 p24抗原的濃度。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

質(zhì)量控制：空白對(duì)照校準(zhǔn)品吸光度值不高于0.050，A點(diǎn)（0pg/mL）吸光度值不高于0.100，F點(diǎn)（400pg/mL）吸光度值不低于1.000。
對(duì)于吸光度值超出校準(zhǔn)品F點(diǎn)的樣品，可用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋適宜倍數(shù)后再行測(cè)定，樣本中HIV-1 p24抗原濃度值為稀釋后測(cè)定值×稀釋倍數(shù)。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

本品僅適用于研究用途，不用于臨床診斷。
本品僅適用于游離的HIV-1 p24抗原含量的檢測(cè)，不能用于總抗原含量的檢測(cè)。
樣本pH應(yīng)保證在5-10之間，過(guò)低或過(guò)高的pH可能會(huì)造成HIV-1 p24抗原的測(cè)量值異常。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

測(cè)定范圍：0~400pg/mL。
分析靈敏度：zui低檢測(cè)限不高于5pg/mL。
校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線的線性：線性相關(guān)系數(shù)R>0.9900。典型校準(zhǔn)曲線如下圖

精密性：批內(nèi)變異系數(shù)（Within-Run CV）不高于10%，批間變異系數(shù)（Between-Run CV）不高于15%。
特異性：與HIV-1和HIV-2的env蛋白、pol蛋白和gag蛋白中的p17（1型）等無(wú)交叉反應(yīng)。
膽紅素（Bilirubin，20mg/dL）、血紅蛋白（Hemoglobin，500mg/dL）和血脂（Triolein， 3,000mg/dL）對(duì)HIV-1 p24抗原的測(cè)量值無(wú)明顯干擾。
抗凝劑（肝素0.2mg/mL、檸檬酸鈉100mg/mL和EDTA 20mg/mL）對(duì)HIV-1 p24抗原的測(cè)量值無(wú)明顯干擾。

【注意事項(xiàng)】

本品僅適用于研究用途。
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，應(yīng)平衡至室溫（18~30℃）后再使用。未用完的微孔條用自封袋密封保存。
儲(chǔ)存和溫育時(shí)應(yīng)避光進(jìn)行。
不得直接用手接觸終止液。若不慎接觸則應(yīng)立即用大量自來(lái)水沖洗。
操作應(yīng)迅速，加樣品時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗滌后放置太久均可能影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
每次測(cè)定均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
操作應(yīng)按說(shuō)明書嚴(yán)格進(jìn)行。嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和時(shí)間，并盡量使用移液器加樣，結(jié)果判定以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混用，不要使用過(guò)期試劑。
本品含有部分動(dòng)物源性物質(zhì)，操作必須符合國(guó)家有關(guān)傳染性疾病檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室管理及安全的規(guī)定，并按有關(guān)實(shí)驗(yàn)室規(guī)程處理所使用組份及樣品。