產(chǎn)品名稱：人Ras同源基因家族成員A（RHOA）ELISA試劑盒

中文別名: 人Ras同源基因家族成員A（RHOA）ELISA檢測(cè)試劑盒；人Ras同源基因家族成員A（RHOA）ELISA酶免試劑盒；人Ras同源基因家族成員A（RHOA）ELISA Kit

英文名稱：Human Transforming protein RhoA（RHOA） ELISA kit

英文別名：ARH12, ARHA, RHO12, RHOH12, Aplysia ras-related homolog 12|oncogene RHO H12|small GTP binding protein RhoA

規(guī)格：96T

種屬：人（Human）

待測(cè)物名稱：ras homolog gene family, member A

縮寫：RHOA

檢測(cè)范圍：30pg/ml  -1800pg/ml

試劑盒保存：2-8°C

有效期：6個(gè)月

靈敏度：

反應(yīng)時(shí)間：1-5個(gè)小時(shí)

所需樣本量：50-100ul

檢測(cè)波長(zhǎng)：450 nm

人Ras同源基因家族成員A（RHOA）ELISA試劑盒 詳細(xì)說(shuō)明：

預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等其它相關(guān)液體中RHOA含量

原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人Ras同源基因家族成員A（RHOA）水平。用純化的人Ras同源基因家族成員A（RHOA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Ras同源基因家族成員A（RHOA），再與HRP標(biāo)記的Ras同源基因家族成員A（RHOA）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ras同源基因家族成員A（RHOA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人Ras同源基因家族成員A（RHOA）濃度。

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800pg/ml， 1200pg/ml，600pg/ml，300pg/ml， 150pg/ml）。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.  配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.  溫育：操作同3。

8.  洗滌：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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