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              脂質體2000說明書

              發(fā)布時間:2015-01-22瀏覽:1630次

              脂質體2000說明書

              描述

              脂質體2000是專門用于將核酸轉染進入真核細胞的一種形式,我們提供下列的建議:

              在多種細胞和培養(yǎng)板中都有很高的轉染效率。在網上列出的細胞類型中都獲得了較高的轉染效率。

              核酸-脂質體2000的復合物可以直接加入到細胞培養(yǎng)液中,無論是有血清還是無血清的情況。

              轉染之后不用移除復合物或者更換培養(yǎng)液,但是復合物應在轉染后4-6h移除。

              轉染的一些重要指導

              DNA轉染使用page3

              我們建議使用Opti-MEM I reduced serum  培養(yǎng)基來稀釋脂質體2000和核酸。

              轉染時不要向培養(yǎng)基中加入抗生素。

              在實驗過程中要保持一樣的條件


              DNA轉染

              使用下列方法在24孔板內轉染DNA進入哺乳動物細胞。對于其他的板子,可以參考page4.所有的數量和體積都是基于一個孔的劑量。準備復合物使DNA(ug):脂質體(ul)的比例為1:2到1:3。轉染時細胞密度較高可以獲得高的效率,高的表達水平,以及使毒性降低。條件的選擇很重要。

              1. 貼壁細胞:在轉染前一天,向24孔板內接種0.5-2*105個細胞,使得細胞在轉染時融合率達到90-95%。切記使用不含抗生素的培養(yǎng)基。
              2. 對于每一個轉染樣品,按照如下方法準備復合物:
                • 使用無血清的培養(yǎng)基將DNA稀釋為50ul,溫和混勻。
                • 使用前混勻脂質體2000,然后用培養(yǎng)基將一定量的脂質體2000稀釋為50ul。室溫孵育5min。

              進行到c時間不超過25min

                  C.5min的孵育后,混合稀釋的DNA和稀釋的脂質體2000(總體積為100ul)。溫和混勻,室溫孵育20min(溶液呈現云霧狀)。

                     混合物在室溫可穩(wěn)定存在6h。

              1. 向含有細胞和培養(yǎng)液的板子中每孔加入100ul的復合物,通過敲打板子和來回晃動使其混合均勻。
              2. 細胞孵育18-48h后可檢測轉染情況。培養(yǎng)液可在轉染4-6h后更換。
              3. 對穩(wěn)定的細胞系:傳代細胞在轉染后以1:10的比例加入新鮮的培養(yǎng)液。第二天加入選擇培養(yǎng)基。


              優(yōu)化轉染

              為了獲得高的轉染效率和低毒性,通過調整細胞濃度和DNA:脂質體2000的比例來優(yōu)化轉染條件。確保細胞90%的融合,以及DNA(ug):脂質體(ul)比例在1:0.5到1:5。


              轉染條件的浮動

                轉染到不同類型的培養(yǎng)板中,脂質體2000的,核酸的量,細胞數以及合適的培養(yǎng)基量,都在下表中顯示。在96孔板中,建議總體積到50ul

              培養(yǎng)容器

              共同試劑

              DNA轉染

              孔內液體體積

              稀釋液體積

              DNA

              脂質體200

              96孔板

              100ul

              2*25ul

              0.2ug

              0.5ul

              24孔板

              500ul

              2*50ul

              0.8ug

              2.0ul

              6孔板

              2ml

              2*250ul

              4.0ug

              10ul

              60mm

              5ml

              2*0.5ml

              8.0ug

              20ul


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