ELISA中常見問題及解決方法

ELISA 試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質量。

下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法

1. 選擇試劑

選擇質量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

2 加樣

可能原因：① 血清或血漿標本分離不好即進行加樣；② 手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)；③ 加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法：① 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。② 加樣后及時放入孵箱。③加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。④ 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。⑤標本較多時，請分批操作。

3. 孵育

可能原因：①孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；② 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。解決辦法：① 貼封片或加蓋；② 按說明步驟嚴格控制操作時間。

4. 洗板

可能原因：①采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。② 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。③ 反應板過多造成洗板等待時間長。解決辦法：① 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；② 合理安排，或多用幾臺洗板機。

5. 顯色

可能原因：①顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；②加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法：① 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；② 加樣時保持顯色劑不外流；③  A、B液應避免接觸金屬器械。

6. 終止

可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。

7. 讀板

如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。

所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸；盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。

在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本，才能保證檢測質量?，F(xiàn)在國內已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。