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              胎牛血清的相關(guān)問題

              發(fā)布時(shí)間:2014-10-10瀏覽:1074次

               胎牛血清的相關(guān)問題

              上海慧穎生物科技有限公司

              近在培養(yǎng)細(xì)胞中使用胎牛血清,由于發(fā)現(xiàn)有沉淀,不知是否變質(zhì),在查閱相關(guān)文獻(xiàn)也沒有得到確切的答案.因此不敢再用原來的血清,導(dǎo)致浪費(fèi).在這提醒大家做細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),要注意血清的分裝.
              血清是細(xì)胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一。在實(shí)驗(yàn)室操作中要注意及處理方法:
              1. 血清保存: 建議血清應(yīng)保存在-5至-2O。然而,若存放于4時(shí),請勿超過一個(gè)月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
              2. 解凍血清的方法: 建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
              3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?
              血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。
              若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙枞倪^濾膜。
              4. 為什么要熱滅活血清?
              加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。
              5. 有必要做熱滅活嗎?
              實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。
              因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!
              6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?
              胎牛血清沒有預(yù)老化,儲存在2-8時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在-20儲存胎牛血清,避免反復(fù)凍融。
              7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
              解凍血清時(shí),請按照所建議的逐步解凍法(-20至4至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20至37),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
              解凍血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
              請勿將血清置于37太久。若在37放置太久,血清會變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
              血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
              若必須做血清的熱滅活,請遵守56,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

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