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RBL-2H3細(xì)胞 RBL-2H3細(xì)胞株 傳代說明
上?；鄯f生物科技有限公司 提供
組份 | 數(shù)目 |
細(xì)胞 | 1 T-25瓶 |
細(xì)胞說明書 | 一份 |
生長特性： | 懸浮生長
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培養(yǎng)條件： | 培養(yǎng)基：90%1640 +10%FBS（推薦HAKATA優(yōu)等胎牛血清 貨號：HN-FBS-50） 氣相：空氣95%，二氧化碳5% 溫度：37℃ |
培養(yǎng)： | 一、貼壁細(xì)胞 1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代； 2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進(jìn)行傳代，次傳代比例為1:2。 3傳代步驟：將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zui佳消化時(shí)間，記錄zui佳消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。
二、懸浮細(xì)胞 1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒，然后置于無菌操作臺，打開瓶口，輕輕吹打后，將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，然后1200rpm離心3min，去上清； 2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基，然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液（離心后去舊液，加入新鮮培養(yǎng)基）； 3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時(shí)，對其進(jìn)行傳代，次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養(yǎng)）。
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細(xì)胞總數(shù)： | 1~3*106 |
傳代周期： | 2-3天 |
傳代比例： | 1:2~1：3 |
換液頻率： | 2-3天 |
凍存液： | 90%FBS+10%DMSO |
四、注意事項(xiàng)：
1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。
2 瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)
3 對于貼壁細(xì)胞，若大部分細(xì)胞漂浮，置于培養(yǎng)箱隔夜觀察，大部分漂浮細(xì)胞重新貼壁，表明細(xì)胞活力正常，繼續(xù)培養(yǎng)，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉；若大部分細(xì)胞仍然不貼壁，將漂浮的細(xì)胞離心收集，用臺盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力，并與本公司銷售人員及時(shí)聯(lián)系。
4 建議客戶收到細(xì)胞后不同倍鏡各拍幾張細(xì)胞的照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)問題請于72h內(nèi)與本公司銷售聯(lián)系，以便于更好的幫您解決問題，超過時(shí)間我段，本公司則默認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好，不免費(fèi)對后續(xù)細(xì)胞狀態(tài)問題進(jìn)行售后。
5 因細(xì)胞產(chǎn)品的特殊性，如客戶對本公司細(xì)胞質(zhì)量存有疑問，請于收到細(xì)胞后一個(gè)月內(nèi)與本公司銷售聯(lián)系，超過時(shí)間段，本公司則默認(rèn)細(xì)胞質(zhì)量優(yōu)良，不承擔(dān)因細(xì)胞產(chǎn)生的任何責(zé)任。
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