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              ED-25(ED 25)細胞培養(yǎng)說明

              發(fā)布時間:2017-10-30瀏覽:2060次
              • 細胞名稱:ED-25(ED 25)細胞
              • 中文名稱:人肝靜脈內皮細胞
              • 供應商:上?;鄯f生物科技有限公司
              • 組成:

              組份

              數(shù)目

              細胞

              1 T-25

              細胞說明書

              一份

              • 細胞簡介:

              生長特性:

              貼壁處理

              細胞來源:

              從ATCC引進/中科院/協(xié)和醫(yī)院等引進

              培養(yǎng)液:

              1640 +10%FBS(德國SERANA胎牛血清或GIBCO 16000-044胎牛血清)

              細胞總數(shù):

              1~3*106

              傳代周期:

              2-3

              傳代比例:

              1:2~1:4

              換液頻率:

              2-3

              凍存液:

              90%FBS+10%DMSO

              細胞狀態(tài):

              良好

               

               

              四、注意事項:

              對于貼壁細胞,若細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,換成新鮮的培養(yǎng)基;如細胞還不貼壁,將細胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中,原培養(yǎng)瓶加部分新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。對于懸浮細胞:收到細胞后,將細胞全部離心,去掉舊的培養(yǎng)基,換成新鮮的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

              特別注意:(如使用公共實驗室或者初次接觸,建議添加雙抗培養(yǎng))

              (1)貼壁細胞收到當天有少量或沒有飄忽的細胞可以當天換液,因為路途顛簸造成大量飄忽的情況時,請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)

              (2)收到細胞后請盡快更換為含10%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過72小時)

              (3)如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并SUER技術人員

              細胞接收后的操作流程與注意事項:

              1)貼壁細胞生長緩慢;適當提高血清濃度(zui高不能超過20%),或可根據(jù)該細胞生長特性生長密度,考慮胰酶消化后,轉移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)

              2)如果細胞為貼壁細胞,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請及時實驗室技術人員會跟進解決

              3)生長不均:貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

              細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)

              (1)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在1-2min)

              (2)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存

              (3)取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)?培養(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

              (4)鏡下觀察消化情況,在細胞生長特性邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让?,加6-8ml*培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。

              請各位老師以隨貨說明為主

               

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