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胎牛血清FBS (fetal bovine serum):心臟穿刺的方法采血。剖腹產(chǎn)胎牛,未接觸外界,血清中的抗體補體等對細胞生長的有害成分zui少。
新生牛血清:出生24小時內(nèi)
小牛血清CS(calf serum):出生10-14天
馬血清HS(horse serum)
常用的血清廠家:GIBCO|SERANA|Bovogen|Gemini|Sigma|PAA|GE Hyclone
常用貨號:10099-141|16000-044|26140-079|10099-133|10010-147|10082-147|S-FBS-SA-015|S-FBS-AU-015|900-108|100-500|F2442|SH30084.03|SH30396.03|SH30070.03|SH30068.03等
GIBCO胎牛血清|10099-141之儲存溫度 常見問題及解決辦法:
一、細胞污染了怎么辦
細菌:用含10倍計量抗生素的PBS沖洗,再用2倍計量的抗生素連續(xù)培養(yǎng)一周。
霉菌:先用無菌槍頭剔除再 PBS沖洗,后加制霉菌素連續(xù)培養(yǎng)一周。
酵母:先用PBS沖洗,后加制霉菌素培養(yǎng)連續(xù)培養(yǎng)一周。
支原體:用含泰樂菌素的培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)一個月。
細胞:亞克隆篩選。
提高血清濃度為15-20%;
提高接種密度;
細胞的離散度;
添加細胞生長因子;
胰蛋白酶消化過度;
支原體污染;
培養(yǎng)液中無貼壁因子
排除細胞污染后主要有以下幾種可能:
細胞長老了,傳代時細胞已100%滿度,細胞衰老;
消化時不*,吹打過度;
血清溶解時直接從-80℃放到37 ℃或室溫;
細胞傳代過程中出現(xiàn)碎片、顆粒、小黑點,消化時,先加1ml胰酶;晃動,棄;再加1ml胰酶常規(guī)消化;收集細胞,低速500-600rpm,5分鐘離心。等細胞貼壁后,立即換液。
五、培養(yǎng)基顏色變紫
培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中, 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而酚紅的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果, 將造成細胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時, 可以擰松瓶蓋, CO2培養(yǎng)箱放置30min 以調(diào)整pH 值。
GIBCO胎牛血清|10099-141之儲存溫度有絮狀沉淀
儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在-20℃或-80 ℃儲存胎牛血清,避免反復凍融.
如有沉淀,可于3000rpm5分鐘離心
上?;鄯f生物市場部 王麗 提醒您收到細胞請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形, 若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng), 或立即冷凍保存 依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例,制備培養(yǎng)基。收到T25 flask 細胞時, 處理方式為︰ 于寄送過程中,為避免起泡造成細胞脫落死亡,T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。請檢查flask 外觀,并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象,若有任何問題, 不要打開蓋子,請立即通知細胞實驗室。 保留其原始培養(yǎng)液。
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