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              KU812細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

              發(fā)布時(shí)間:2017-02-23瀏覽:1201次

              KU812細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

              產(chǎn)品名稱:KU812細(xì)胞

              中文名稱:人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞

              種屬:人

               

              2017年新學(xué)期,迎著朝陽(yáng),放飛夢(mèng)想,久別重逢,相聚一堂,百尺竿頭,更進(jìn)一步,學(xué)無(wú)止境,自立自強(qiáng),為國(guó)爭(zhēng)光,慧穎細(xì)胞庫(kù)為答謝各位莘莘學(xué)子的厚愛(ài),在新學(xué)期開(kāi)學(xué)之際,將慧穎細(xì)胞庫(kù)1223株細(xì)胞特惠出售,更多活動(dòng)詳情,請(qǐng)致電市場(chǎng)部!

               

              KU812細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

              有的客戶在COS-1細(xì)胞復(fù)蘇傳代后發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞狀態(tài)不好,形態(tài)不佳,透光度亦不好,如果老師認(rèn)為復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)問(wèn)題,那就核實(shí)下是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題,還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題。

              有的老師認(rèn)為首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板。

              1、確認(rèn)下凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,即使書(shū)上也不講這個(gè)問(wèn)題,但我們因?yàn)檫@個(gè)問(wèn)題就兩種肺癌細(xì)胞和一種肝癌細(xì)胞專門(mén)做過(guò)試驗(yàn),這個(gè)是絕大部分人細(xì)胞復(fù)不活的一個(gè)原因。太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。

               

              2、老師的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。

               

              3、老師的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過(guò)7%,大于5%,太多也不好。

               

              4、老師在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。

               

              5、老師的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。

               

              6、如果老師的細(xì)胞污染,你是否能很快看到。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。

               

              7、老師的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密。

               

              還有,我們是不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問(wèn)題在操作。我們的細(xì)胞房不換拖鞋,非常臟,別人的細(xì)胞都污染,很多細(xì)胞都污染到絕種,但我們的只污染一次(兩年內(nèi)只有兩瓶),那次是因?yàn)楫?dāng)初有某高校組織學(xué)生參觀我們細(xì)胞庫(kù)給動(dòng)過(guò)了,我們每次細(xì)胞擺放順序都是記住的。如果老師老懷疑孵箱污染,我們會(huì)認(rèn)為老師的復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)還需要進(jìn)一步熟練和積累經(jīng)驗(yàn)。

              每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問(wèn)題,這個(gè)很重要,不能靠猜。

              KU812細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

              MN60    人B細(xì)胞白血病細(xì)胞  人  B細(xì)胞白血??;男性   1640    懸浮       

              COLO-1  人角質(zhì)形成層細(xì)胞    人  角質(zhì)形成層  DMEM    貼壁       

              Hut-102 人皮膚T淋巴瘤細(xì)胞  人  皮膚;T淋巴瘤   1640    懸浮       

              HPMC    人腹膜間皮細(xì)胞  人  腹膜間皮細(xì)胞    1640    貼壁       

              SK-N-FI     人腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞    人  神經(jīng)母細(xì)胞瘤;男性  DMEM    貼壁       

              OCI-LY1 人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞    人  彌漫大B淋巴瘤;男性    IMDM    懸浮       

              hRPE    人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞    人  視網(wǎng)膜;色素上皮細(xì)胞    1640    貼壁       

              SG231   人膽管上皮癌細(xì)胞    人  肝內(nèi)膽管癌;男性    1640    貼壁   

              CCLP1   人膽管癌細(xì)胞    人  肝內(nèi)膽管癌;女性    DMEM    貼壁   

              hESC    人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞  人  子宮內(nèi)膜;間質(zhì)細(xì)胞;女性    EMEM    貼壁   

              BAr-T   人食管上皮細(xì)胞  人  食管;HGNC-TERT轉(zhuǎn)化;男性   DMEM    貼壁   

              HIBEC   人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞 人  肝內(nèi)膽管;上皮細(xì)胞 1640    貼壁   

              KYSE180 人食管鱗癌細(xì)胞  人  食管鱗癌;男性  1640    貼壁   

              melan-a 小鼠黑色素細(xì)胞  小鼠    黑色素細(xì)胞;自發(fā)永生;C57BL/6   1640    貼壁   

              RBSMC   大鼠腦動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞    大鼠    腦動(dòng)脈;平滑肌  DMEM    貼壁   

               H4IIEC3    大鼠肝癌細(xì)胞    大鼠    肝癌;雄性;AxC DMEM    貼壁   

              LIPF155C    人膽管癌細(xì)胞    人  膽管癌  DMEM/1640   貼壁   

              LIPF178C    人膽管癌細(xì)胞    人  膽管癌  DMEM/1640   貼壁   

              SW1783  人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞  人  間變性星形細(xì)胞瘤;男性  DMEM    貼壁   

              LICCF   人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞    人  肝內(nèi)膽管癌  1640    貼壁   

              QGY7703 人肝癌細(xì)胞  人  肝癌;女性  1640    貼壁   

              HCCLM6  人肝癌細(xì)胞  人  肝癌    1640    貼壁   

              ST2 小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞    小鼠    基質(zhì);BALB/c    DMDM    貼壁   

              K7M2-WT 小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞  小鼠    骨肉瘤;肺轉(zhuǎn)移;雌性;BALB/c    EMEM    貼壁   

              WB-F344 大鼠肝上皮樣干細(xì)胞  大鼠    肝;自發(fā)永生;Fischer 344   DMEM    貼壁   

              Hs683   人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞  人  少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤;男性    DMEM    貼壁   

              SV40-MES-13 小鼠腎小球系膜細(xì)胞  小鼠    腎小球系膜;SV40轉(zhuǎn)化    DMEM    貼壁   

              C8166   人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞  人  T淋巴細(xì)胞白血?。籋TLV-1轉(zhuǎn)化    1640    懸浮   

              HSAEC1-KT   人肺小氣道上皮細(xì)胞  人  肺;HGNC-TERT轉(zhuǎn)化;男性 DMEM    貼壁   

              L-540   人霍奇金淋巴瘤細(xì)胞  人  霍奇金淋巴瘤;女性  1640    懸浮   

              rRMECs  大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞    大鼠    視網(wǎng)膜微血管;內(nèi)皮細(xì)胞  DMEM    貼壁   

              GC9811-P    人胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞    人  胃癌    1640    貼壁   

              HepG2.2.15  穩(wěn)轉(zhuǎn)HBV病毒HepG2細(xì)胞  人  肝癌;穩(wěn)轉(zhuǎn)HBV病毒  IMDM    貼壁   

              BSC40   非洲綠猴腎細(xì)胞  非洲綠猴    腎;自發(fā)永生    DMEM    貼壁   

              SNU-5   人胃癌細(xì)胞  人  胃癌;女性  1640    懸浮   

                                     

              RASMCs  大鼠氣道平滑肌細(xì)胞  大鼠    氣道平滑肌  DMEM    貼壁   

              OSK-1   小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)   小鼠    誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞    DMEM    貼壁   

              B35 大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞    大鼠    神經(jīng)母細(xì)胞瘤;BDIX  DMEM    貼壁   

              HCE-2 [50.B1]   人角膜上皮細(xì)胞  人  角膜上皮;Ad12-SV40;男性   1640    貼壁    為了應(yīng)付季節(jié)變化CV-1細(xì)胞運(yùn)輸、培養(yǎng)帶來(lái)的真菌等污染問(wèn)題,公司特做以下建議:

              1)細(xì)胞的運(yùn)輸、轉(zhuǎn)移過(guò)程中,請(qǐng)勿打開(kāi)自封袋;拿放細(xì)胞時(shí)請(qǐng)持瓶體,切勿在非無(wú)菌環(huán)球中碰觸、擰動(dòng)瓶口封口膜位置

              2)進(jìn)入生物安全柜前,打開(kāi)自封袋拿出培養(yǎng)瓶,噴上酒精放進(jìn)操作臺(tái)(不建議使用酒精棉球擦拭),撕開(kāi)封口膜后,用酒精燈外焰對(duì)瓶口燒灼一圈(3秒左右)

              3)豎立培養(yǎng)瓶,擰開(kāi)瓶蓋(如是貼壁細(xì)胞,請(qǐng)用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基,切勿讓瓶口處的液體回流進(jìn)瓶?jī)?nèi))

              4)更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基,嚴(yán)格按照無(wú)菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)

              KU812細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

               

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