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              J82細胞之正確轉(zhuǎn)染

              發(fā)布時間:2017-02-23瀏覽:1200次

              J82細胞之正確轉(zhuǎn)染

              產(chǎn)品名稱:J82細胞

              中文名稱:人膀胱移行細胞癌

              種屬:人

               

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              J82細胞之正確轉(zhuǎn)染

              常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(*轉(zhuǎn)染)和瞬時轉(zhuǎn)染兩類。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA 既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體存在。瞬時轉(zhuǎn)染則指外源DNA/RNA 不整合到宿主染色體中,一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。

              轉(zhuǎn)染方法不同,對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響很大。常見的轉(zhuǎn)染方法有:

              1. 磷酸鈣法:該方法利用磷酸鈣DNA 復(fù)合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞原理得到瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)果,操作簡便但重復(fù)性差,不可用于原代細胞的轉(zhuǎn)染。

              2. DEAE-右旋糖苷法:帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細胞內(nèi)吞,可用于瞬時轉(zhuǎn)染,方法相對簡便、結(jié)果可重復(fù)但對細胞有一定的毒副作用。

              3. 電穿孔法:利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導入。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時轉(zhuǎn)染均適用。適用性廣但細胞致死率高,DNA 和細胞用量大, 需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件。

              4. 病毒介導法:通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中。適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞,體內(nèi)細胞等。

              5. 陽離子脂質(zhì)體法:帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物被細胞內(nèi)吞從而形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或瞬時性轉(zhuǎn)。該方法適用性廣,轉(zhuǎn)染效率高,重復(fù)性好,但轉(zhuǎn)染時需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大。

              6. 顯微注射法:用顯微操作將DNA 直接注入靶細胞核,適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞。

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